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阴离子交换色谱柱的再生方法你了解几种?

点击次数:1974 发布时间:2018-10-18
 
  阴离子交换色谱柱是指离子交换色谱中的固定相中的一些带电荷的基团,这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。如果流动相中存在其他带相反电荷的离子,按照质量作用定律,这些离子将与结合在固定相上的反离子进行交换。
  阴离子交换色谱柱基本原理:
  离子交换色谱是蛋白纯化技术中常用的一种纯化方法,其原理是指被分离物质所带的电荷可与离子交换剂所带的相反电荷结合,这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的,在改变pH或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时,离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同,其与离子交换剂的结合能力也不同,所以被洗脱到溶液中的顺序也不同,从而被分离出来。
  阴离子交换色谱柱的再生方法有两种:
  (1)先用25ml蒸馏水通过柱子以除去缓冲盐类,再用25ml甲醇冲洗,以除去由于分配效应而残存在骨架中的杂质,再用25ml蒸馏水除去不溶于甲醇的残存盐类,后用缓冲液平衡。
  (2)先用0.1mol/L的柠檬酸洗涤,然后用水洗涤(不要用碱性溶液,以防硅胶基质溶解),后用缓冲液平衡。
  阴离子交换色谱柱的操作压力是不能超过色谱柱说明书中规定的大压力的,否则会造成色谱不可逆损失。
  离子色谱柱的启动 采用标准淋洗液(一般指等淋洗条件)使淋洗达到平衡后,进行色谱标准阴离子的测试分离度和重视性。
  炉子子色谱柱的储放 一般情况下,可以采用标准淋洗液作为储备液,长期储备需要将色谱柱两端密封。但对于非抑制型离子色谱柱或早期的抑制型离子色谱柱,由于所有淋洗液比较接近中性,用淋洗液储放易于长霉,因此需要用高PH值的溶液作储备液,或者的淋洗液中加入防霉剂作储备液。
 
 
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