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制备型液相色谱仪样品的前处理事项

点击次数:816 发布时间:2017-10-09
 
  制备型液相色谱仪样品的前处理事项
  
  制备型液相色谱仪安全注意事项
  
  1、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
  
  2、在流动相配制好后,一定要进行脱气,除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。水相流动相需经常更换(一般不超过2天),防止长菌变质。
  
  3、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇/乙腈中。
  
  制备型液相色谱仪样品的前处理:
  
  制备型液相色谱仪色谱柱分离的样品多,比分析型液相色谱柱更容易受污染,样品前处理非常必要。
  
  三氟乙酸(TFA)在缓冲液中的作用:
  
  1、TFA起到类似离子对的作用,一般浓度在0.05%~0.1%。浓度过高会使溶液偏酸,长时间使用可能影响色谱柱寿命。
  
  2、TFA可抑制硅胶表面的硅醇基,改善碱性化合物的峰形。若0.1%TFA分离不好,可加大浓度到0.2%,但用完后要及时冲洗色谱柱。
  
  3、走梯度时走成基线漂移,但对制备影响不大。
  
  制备型液相色谱仪降低柱压的方法:
  
  采用1%乙酸水溶液和甲醇二元梯度。
  
  制备型液相色谱仪提高检测下限的方法:
  
  1、如果是等度洗脱,一定要改成单元等度。
  
  2、尽量采用乙腈-水系统洗脱。乙腈紫外吸收小,相同条件下噪音小。
  
  制备型液相色谱仪用水要求:
  
  不含金属离子和细菌。
  
  制备型液相色谱仪分析方法开发中流动相的调整原则:
  
  1、由强到弱:
  
  一般先用90%的乙腈或甲醇-水或缓冲溶液进行试验,可很快得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
  
  2、三倍规则:
  
  每减少10%的有机溶剂(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加约3倍,此为三倍规则。调整时注意观察各个峰的分离情况。
  
  3、粗调转微调:
  
  当分离达到一定程度时,应将有机溶剂(乙腈或甲醇)10%的改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。
 
 
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